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龍圖騰網獲悉中國人民解放軍陸軍軍醫大學第一附屬醫院申請的專利一種誘導肝卵圓細胞系在肝臟去細胞生物支架上形成功能性類肝樣器官組織的方法獲國家發明授權專利權，本發明授權專利權由國家知識產權局授予，授權公告號為：CN110669721B 。

龍圖騰網通過國家知識產權局官網在2025-12-23發布的發明授權授權公告中獲悉：該發明授權的專利申請號/專利號為：201910984638.6，技術領域涉及：C12N5/071；該發明授權一種誘導肝卵圓細胞系在肝臟去細胞生物支架上形成功能性類肝樣器官組織的方法是由白蓮花;陳泉余;夏仁培;游小琳;賴潔娟;蔣施放;張玉君;張宏宇;張雷達設計研發完成，并于2019-10-16向國家知識產權局提交的專利申請。

本一種誘導肝卵圓細胞系在肝臟去細胞生物支架上形成功能性類肝樣器官組織的方法在說明書摘要公布了：本發明涉及一種誘導肝卵圓細胞系在肝臟去細胞生物支架上形成功能性類肝樣器官組織的方法，屬于生物技術領域，該方法中主要將肝卵圓細胞系HOCL作為種子干細胞，植入具有生物活性的再生期肝臟去細胞生物支架R?DLS中，根據體外模擬體類肝臟器官發育微環境理念，加入能誘導HOCL肝向功能分化和重建功能性肝臟器官組織結構的條件培養液，在體外3D培養體系中構建功能性類肝樣器官組織。該方法中在R?DLS中經體外3D培養體系的HOCL在2?24h時就顯示了其向功能肝細胞分化，21天即可形成類肝樣器官組織，采用本專利方法構建的“新肝臟”對作為肝移植供體和治療ESLD具有重要臨床轉換價值。

本發明授權一種誘導肝卵圓細胞系在肝臟去細胞生物支架上形成功能性類肝樣器官組織的方法在權利要求書中公布了：1.一種誘導肝卵圓細胞系在肝臟去細胞生物支架上形成功能性類肝樣器官組織的方法，其特征在于，所述方法如下： 1將間充質干細胞分別通過門靜脈、肝動脈和下腔靜脈植入肝臟去細胞生物支架中，加入誘導內皮細胞分化培養液，靜態培養5-7天，培養后期逐漸將所述誘導內皮細胞分化培養液替換為誘導膽管細胞分化培養液； 所述誘導內皮細胞分化培養液和誘導膽管細胞分化培養液的制備方法如下： A、按體積比1:4-32將去除細胞成分的哺乳動物胚胎期或新生期肝臟勻漿濾液加入DMEMF12培養液中，再加入青霉素-G、鏈霉素、L-谷氨酰胺、非必須氨基酸、丙酮酸鈉和HEPES，混勻后再加入牛胰島素、人轉鐵蛋白、左旋甲狀腺素、三碘甲狀腺素、亞硒酸鈉、腐胺、孕激素和白蛋白，至所述青霉素-G終濃度為100UmL，鏈霉素終濃度為100μgmL，L-谷氨酰胺終濃度為5mM，非必須氨基酸、丙酮酸鈉和HEPES終濃度均為25mM，牛胰島素終濃度為3.33μgmL，人轉鐵蛋白終濃度為3.33μgmL，左旋甲狀腺素終濃度為0.26μgmL，三碘甲狀腺素終濃度為0.22μgmL，亞硒酸鈉終濃度為3.33μgmL，腐胺終濃度為1.06μgmL，孕激素終濃度0.04μgmL，白蛋白終濃度為0.04μgmL，獲得基礎培養液； B、向步驟A中獲得的基礎培養液中加入內皮細胞生長因子，至所述內皮細胞生長因子終濃度為20ngmL，獲得誘導內皮細胞分化培養液； C、向步驟A中獲得的基礎培養液中加入重組lgr5、重組HNF6和抗-CEBP-β抗體，至所述重組lgr5終濃度為200ngmL，重組HNF6終濃度為200ngmL，抗-CEBP-β抗體終濃度為50ngmL，獲得誘導膽管細胞分化培養液； 2將肝卵圓細胞系通過膽管植入經步驟1處理后的肝臟去細胞生物支架中，先靜態培養3-5天，后動態培養4-5天，且在所述動態培養期間逐漸將所述誘導膽管細胞分化培養液替換為誘導成熟肝細胞分化培養液； 所述誘導成熟肝細胞分化培養液的制備方法如下： 向所述步驟A中獲得的基礎培養液中加入重組HNFβ、重組HNF4α、抗-CEBP-α抗體、重組肝細胞生長因子、重組beta-纖維生長因子、抑瘤素M和地塞米松，至所述重組HNFβ終濃度為200ngmL，重組HNF4α終濃度為200ngmL，抗-CEBP-α抗體終濃度為50ngmL，重組肝細胞生長因子終濃度為100ngmL，重組beta-纖維生長因子終濃度為50ngmL，抑瘤素M終濃度為20ngmL，地塞米松終濃度為0.1μM，獲得誘導成熟肝細胞分化培養液； 3將肝卵圓細胞系分別通過門靜脈、肝動脈和下腔靜脈植入經步驟2處理后的肝臟去細胞生物支架中，動靜態交替培養至少7天，即可； 所述動靜態交替培養中動態培養具體為：在37℃、體積分數為5％CO條件下，按體積為300-500mL的培養容器計，期間每天補加所述誘導成熟肝細胞分化培養液1次，每次5-10mL；每天8:00am-22:00pm，將誘導成熟肝細胞分化培養液通過循環泵輸入肝臟去細胞生物支架中，同時以小于20rpm的轉速水平旋轉培養，所述循環泵的速度為20rpm；所述動靜態交替培養中靜態培養具體為：每天22:00pm-8:00am靜置培養； 所述肝臟去細胞生物支架為具有生物活性的離體再生期肝臟去細胞生物支架。

如需購買、轉讓、實施、許可或投資類似專利技術，可聯系本專利的申請人或專利權人中國人民解放軍陸軍軍醫大學第一附屬醫院，其通訊地址為：400038 重慶市沙坪壩區高灘巖正街30號；或者聯系龍圖騰網官方客服，聯系龍圖騰網可撥打電話0551-65771310或微信搜索“龍圖騰網”。

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